Jak poškození DNA a senescentní buňky formují vědu o stárnutí

Věda o stárnutí zkoumá 15 odlišných biologických znaků, které určují, jak se lidské tělo v průběhu času mění. Mezi tyto propojené mechanismy patří poškození DNA, zkrácené telomery, nerovnováha střevního mikrobiomu a selhání buněčné recyklace. Věda o stárnutí navíc pomáhá vysvětlit, jak mohou zásahy do životního stylu cílit na tyto biologické dráhy. Tento průvodce převádí složitou vědu o dlouhověkosti do praktických poznatků pro lidi, kteří dbají o zdraví a hledají na důkazech založené způsoby, jak prodloužit healthspan. Pochopení těchto procesů stárnutí nabízí možné vodítko, jak zpomalit biologický úpadek. Cílená výživa, fyzická aktivita, techniky snižování stresu a nové vědecké intervence mohou pomoci optimalizovat biologický proces, který lze ovlivnit.

„Kdo by chtěl hodně jíst, musí jíst málo, protože tím, že bude jíst méně, bude žít déle, a tak bude moci jíst více.“, Luigi Cornaro (1484–1566)

Historické pohledy na stárnutí

Stárnutí a snaha zvrátit proces stárnutí lidi fascinovaly napříč dějinami. Jeden z prvních doložených pokusů o zvrácení procesu stárnutí pochází od benátského šlechtice Luigiho Cornara (1467-1566), který vydal knihu "The Art of Living Long" a popsal v ní životní styl vedoucí k dlouhověkosti. V mládí Cornaro žil požitkářsky, což u něj do 35 let vedlo k četným zdravotním problémům. Po změně životního stylu se dožil téměř 100 let.

První formální studie stárnutí od Mohammad bin Yousuf al-Harawiho byla publikována Ibn Sina Academy of Medieval Medicine Sciences v roce 1582 v jeho knize Ainul Hayat ("Zdroj života"). Tato kniha se věnovala behaviorálním faktorům a faktorům životního stylu, které ovlivňují stárnutí, včetně stravy, prostředí, bytových podmínek a léků, jež mohou rychlost stárnutí zvyšovat nebo snižovat.

Novodobá historie výzkumu stárnutí

Novodobý výzkum stárnutí představuje vědecké studium stárnutí a tento obor v uplynulém století výrazně zrychlil svůj vývoj.

• 1908: nositel Nobelovy ceny Elie Metchnikoff (1845-1916) objevil fagocytózu, klíčovou součást imunitního systému, a zavedl termín "gerontologie".
• 1915-1917: Thomas Osborne provedl první systematické experimenty, které měly určit účinky omezení příjmu potravy na délku života u potkanů.
• 30. léta 20. století: Rudolph Schoenheimer objevil izotopové značení biomolekul, čímž ukázal, že všechny složky organismu jsou v neustálém stavu chemické obnovy.
• 1956: Denham Harman představil teorii volných radikálů stárnutí, podle níž organismy stárnou proto, že v nich dochází k hromadění oxidačního poškození.
• 1962, 1974, 2001, 2009, 2012, 2015, 2016, 2017: objevy oceněné Nobelovou cenou se týkaly molekulární struktury DNA; lysozomů, později rozpoznaných jako zásadních pro autofagii; klíčových regulátorů buněčného cyklu; toho, jak jsou chromozomy chráněny telomerami a enzymem telomerázou; skutečnosti, že zralé buňky lze přeprogramovat na pluripotentní; toho, jak buňky opravují poškozenou DNA; mechanismů autofagie; a molekulárních mechanismů řídících cirkadiánní rytmus.
• 2019: David Sinclair zpopularizoval vědu o stárnutí svou knihou Lifespan: Why We Age and Why We Don't Have To.

Původních devět znaků stárnutí

Původních devět znaků stárnutí označuje rámec z roku 2013, který publikoval Carlos López-Otín a jeho kolegové a který identifikoval a kategorizoval buněčné a molekulární znaky stárnutí.(1) Článek navrhl devět znaků, které přispívají k procesu stárnutí a společně určují fenotyp stárnutí.

Charakteristický znak by měl ideálně splňovat tři kritéria:

1. Měl by se projevovat během normálního stárnutí.
2. Jeho experimentální zhoršení by mělo stárnutí urychlovat.
3. Jeho experimentální zlepšení by mělo zpomalovat normální proces stárnutí a prodlužovat zdravou délku života.

1. Genomová nestabilita

Vnější fyzikální, chemické a biologické vlivy neustále ohrožují integritu a stabilitu DNA a vnitřní hrozby, včetně chyb při replikaci DNA, spontánních hydrolytických reakcí a tvorby reaktivních forem kyslíku, nakonec vedou k hromadění genetického poškození v průběhu celého života.(2-3)

2. Zkracování telomer

Telomery jsou zvláště náchylné k poškození souvisejícímu s věkem. Zkracování telomer se pozoruje při normálním stárnutí u lidí i myší. Telomery jsou vázány multiproteinovým komplexem zvaným shelterin, který zabraňuje přístupu proteinů opravujících DNA k telomerám. Bez něj by byly telomery opravovány jako zlomy DNA, což by vedlo ke srůstům chromozomů. Poškození DNA na telomerách je pozoruhodně stálé a vysoce účinně vyvolává senescenci.(4-7)

3. Epigenetické změny

Mnoho epigenetických změn ovlivňuje všechny buňky a tkáně po celý život a je způsobeno stravou, chemickými látkami, léky, slunečním zářením, teplem/chladem, cvičením atd. Epigenetické změny zahrnují změny ve vzorcích metylace DNA, posttranslační modifikace histonů a remodelaci chromatinu. Členové rodiny sirtuinů (na NAD závislé proteinové deacetylázy a ADP-ribosyltransferázy) byli rozsáhle studováni jako potenciální faktory proti stárnutí. U lidí se na zdravém stárnutí podílejí alespoň tři členové rodiny sirtuinů (SIRT1, SIRT3 a SIRT6).(8-10)

4. Ztráta proteostázy

Proteostáza zahrnuje mechanismy stabilizace správně složených proteinů (zejména proteinů rodiny teplotního šoku) a mechanismy degradace proteinů prostřednictvím proteazomu a lysozomu. Více studií prokázalo, že stárnutí mění proteostázu, což vede k chronické přítomnosti nesložených, chybně složených a agregovaných proteinů. Ty přispívají k rozvoji některých degenerativních onemocnění souvisejících s věkem, například Alzheimerovy choroby.(11-13)

Obrázek: Ztráta proteostázy. Selhání opětovného sbalení nebo degradace nesložených proteinů může vést k jejich hromadění a agregaci, což má za následek proteotoxické účinky.
Zdroj: López-Otín, C. & Blasco, M. & Partridge, L. & Serrano, M. & Kroemer, G. (2013). The hallmarks of aging. Cell 153 (6): 1194–1217.

5. Deregulované vnímání živin

Signalizace IGF-1 a inzulinu, známá jako dráha IIS, je v evoluci nejzachovalejší dráhou řídící stárnutí. Kromě dráhy IIS, která se podílí na vnímání glukózy, existují ještě tři další související a vzájemně propojené systémy vnímání živin: mTOR (vnímání vysokých koncentrací aminokyselin), AMPK (vnímání nízkoenergetických stavů detekcí vysokých hladin AMP) a sirtuiny (vnímání nízkoenergetických stavů detekcí vysokých hladin NAD+). Existují přesvědčivé důkazy, že anabolická signalizace (mTOR, vysoký inzulin) urychluje stárnutí, zatímco snížená nutrientní signalizace (AMPK, nízký inzulin) prodlužuje dlouhověkost.(14-16)

6. Mitochondriální dysfunkce

Bylo zjištěno, že mitochondriální dysfunkce se v průběhu stárnutí zvyšuje. Jak organismus stárne, klesá účinnost buněčného dýchacího řetězce, což vede k úniku elektronů a snížené tvorbě ATP. Snížená účinnost mitochondriální bioenergetiky s věkem může být důsledkem více vzájemně se protínajících mechanismů, včetně snížené biogeneze mitochondrií, hromadění mutací a delecí v mtDNA, oxidačního stresu mitochondriálních proteinů, destabilizace dýchacího řetězce, změn v lipidovém složení mitochondriálních membrán a změn v mitochondriální dynamice.(17-19)

7. Buněčná senescence

Protože počet senescentních buněk s věkem roste, předpokládá se, že senescence přispívá ke stárnutí. Senescence je však potřebná k prevenci šíření a proliferace poškozených buněk tím, že spouští odpověď imunitního systému. Tento buněčný kontrolní bod vyžaduje účinný systém náhrady buněk, který zahrnuje jak odstranění senescentních buněk, tak mobilizaci progenitorových buněk k obnovení optimálního počtu buněk.

Senescentní buňky vykazují výrazné změny ve svém sekretomu, který je zvláště obohacen o prozánětlivé cytokiny a matrixové metaloproteinázy. Tento jev se proto označuje jako senescencí asociovaný sekreční fenotyp (SASP).(20)

8. Vyčerpání kmenových buněk

Dospělé kmenové buňky se mohou samy obnovovat a diferencovat do více typů buněk v rámci tkáně. Přestože se fenotypy i mechanismy výrazně liší, funkce všech populací kmenových buněk s věkem klesá. Vyčerpání kmenových buněk je sjednocujícím důsledkem různých poškození spojených se stárnutím a pravděpodobně představuje jednoho z hlavních viníků buněčného stárnutí.(21)

Studie na starých myších ukázaly celkový pokles aktivity buněčného cyklu hematopoetických kmenových buněk (HSCs), což souvisí s hromaděním poškození DNA a nadměrnou expresí proteinů inhibujících buněčný cyklus (např. p16INK4a). Zkracování telomer je také významnou příčinou úbytku kmenových buněk během stárnutí.(22-24)

9. Změněná mezibuněčná komunikace

Buněčné stárnutí probíhá také na úrovni mezibuněčné komunikace. Zahrnuje neurohormonální signalizaci, zvýšené zánětlivé reakce, imunitní dohled nad patogeny a prekancerózními buňkami a změny v extracelulárním prostředí.

Stárnutí způsobené zánětem se nazývá inflammaging. Může být důsledkem více příčin, například hromadění prozánětlivého poškození tkání, neschopnosti dysfunkčního imunitního systému účinně odstraňovat patogeny a dysfunkční hostitelské buňky, nebo nedostatečné autofagické odpovědi.(25)

Změny spojené se stárnutím v jedné tkáni mohou vést ke zhoršení sousední tkáně typickému pro stárnutí. Senescentní buňky mohou navozovat senescenci ve svých sousedních buňkách prostřednictvím mezibuněčných kontaktů zprostředkovaných nexusy a procesů zahrnujících reaktivní formy kyslíku. Tento jev se také nazývá bystander efekt senescentních buněk.(26)

Ztuhnutí extracelulární matrix: nový potenciální znak?

V roce 2021 publikovali výzkumníci Alexander Fedintsev a Alexey Moskalev článek zkoumající ztuhnutí extracelulární matrix (ECM) a hromadění příčných vazeb mezi dlouhověkými molekulami, jako jsou kolagen a elastin. Uvádějí, že neenzymatické chemické reakce, jako je glykace, karbamylace a karbonylace, způsobují ztuhnutí ECM. To by dokonce mohlo být primární příčinou několika obecně přijímaných znaků stárnutí, například buněčné senescence.

Tyto změny vedou k tvorbě aduktů a příčných vazeb, které následně způsobují zánět, fibrózu, poruchu cirkadiánních hodin tkání, stárnutí kmenových buněk, atd. Již dříve bylo prokázáno, že konečné produkty pokročilé glykace (AGEs) mají patogenní význam v různých tkáních a drahách v těle. Organismy s mimořádně dlouhou délkou života, jako jsou velryby grónské, mají mimořádně nízkou míru hromadění AGEs.(27)

Rozšíření z 9 na 12 znaků stárnutí

Rozšíření z 9 na 12 znaků stárnutí odkazuje na aktualizaci rámce znaků stárnutí z roku 2023, publikovanou v Cell, ve které López-Otín a kolegové přidali 3 nové znaky: dysbiózu, chronický zánět a narušenou makroautofagii.(28)

Studie z roku 2023, "Hallmarks of aging: expanding universe," představuje tato doplnění jako rozšíření stávajícího modelu, a posouvá tak rámec z 9 znaků na 12 znaků. V tomto kontextu jsou dysbióza, chronický zánět a narušená makroautofagie identifikovány jako nově přidané znaky v aktualizovaném rámci.(28) Citované údaje o publikaci jako zdroji jsou López-Otín, C. & Blasco, M. & Partridge, L. & Serrano, M. & Kroemer, G. (2023). Hallmarks of aging: An expanding universe. Cell 186 (2): P243–278.

Obrázek: Znaky stárnutí.
Zdroj: López-Otín, C. & Blasco, M. & Partridge, L. & Serrano, M. & Kroemer, G. (2023). Hallmarks of aging: An expanding universe. Cell 186 (2): P243–278.

10. Dysbióza

Dysbióza je nerovnováha ve střevním mikrobiálním společenství, která vede ke chronickému zánětu a dalším nepříznivým zdravotním dopadům. S věkem se zvyšuje individualita našich střevních mikrobiomů, což je jev spojený s dobře známými mikrobiálními metabolity zapojenými do regulace imunity, zánětu a stárnutí.

V pozdějších letech mají zdraví jedinci tendenci udržovat trajektorii směrem k odlišnému mikrobiálnímu složení, zatímco u osob s horším zdravím je tento posun menší nebo zcela chybí. To zdůrazňuje zásadní roli střevního mikrobiomu v procesu stárnutí a naznačuje, že modulace mikrobiomu by mohla být slibná pro udržení zdraví a prevenci onemocnění souvisejících s věkem.(29)

11. Chronický zánět

Chronický neboli tichý zánět je dalším nově přidaným znakem stárnutí. Chronický zánět vzniká tehdy, když je imunitní systém neustále aktivován, což vede k poškození tkání a jejich dysfunkci. S přibývajícím věkem mají tendenci stoupat hladiny zánětlivých cytokinů a krevních biomarkerů, jako je CRP. To ukazuje na přítomnost nízkoúrovňového zánětu, který je jedním ze znaků procesu stárnutí. Zejména zvýšené hladiny IL-6 v krevním řečišti slouží jako prediktivní biomarker mortality ze všech příčin u stárnoucí lidské populace.(30)

To podtrhuje význam sledování zánětu jako klíčového faktoru stárnutí a s ním spojených onemocnění. Chronický zánět přispívá k mnoha onemocněním souvisejícím s věkem, včetně Alzheimerovy choroby, rakoviny a kardiovaskulárních onemocnění.

12. Narušená makroautofagie

Narušená makroautofagie (neboli jednoduše autofagie) je třetím nově přidaným znakem stárnutí. Makroautofagie je buněčný proces, který odstraňuje poškozené nebo nefunkční organely a proteiny. Když je makroautofagie narušena, tyto poškozené složky se v buňkách hromadí, což vede k buněčné dysfunkci a onemocnění.

Autofagie přispívá k proteostáze a ovlivňuje neproteinové makromolekuly (např. cytosolickou DNA, lipidy, glykogen) i organely, jako jsou mitochondrie (cílené procesem mitofagie), lysozomy (lyzofagie), endoplazmatické retikulum (retikulofagie), peroxisomy (pexofagie) a napadající patogeny (xenofagie). Jedním z nejvýznamnějších důvodů snížené obnovy organel je pokles autofagie s věkem.(31)

Propojení jednotlivých znaků

Ve své nedávné studii López-Otín et al. uvádějí, že těchto dvanáct základních znaků stárnutí je funkčně provázaných. Tyto znaky ukazují na klíčové determinanty, které řídí proces stárnutí, a jsou propojeny s osmi hlavními atributy dobrého fungování organismu. Ty se vztahují k celé škále organizačních rysů, jako je prostorová kompartmentalizace, udržování homeostázy po delší dobu a odpovědi na poruchy.

Kromě toho jsou znaky stárnutí spojeny s osmi navrhovanými vrstvami organizace organismu. Výše uvedené faktory společně vytvářejí komplexní multidimenzionální prostor interakcí, který objasňuje některé zásadní rysy procesu stárnutí. Pochopením těchto souvislostí a interakcí mohou výzkumníci odhalit nové poznatky o mechanismu stárnutí, což může vést k vývoji účinnějších strategií pro podporu zdravého stárnutí a zlepšení kvality života starších osob.

Image: Propojení znaků.
Source: López-Otín, C. & Blasco, M. & Partridge, L. & Serrano, M. & Kroemer, G. (2023). Hallmarks of aging: An expanding universe. Cell 186 (2): P243–278.

Přidání další vrstvy: 3 nejnovější znaky stárnutí

Jak věda o stárnutí a dlouhověkosti postupuje, může být někdy obtížné držet krok se všemi nejnovějšími výzkumy, zejména v této rychle se rozvíjející oblasti. To znamená, že existují tři nové návrhy, které by bylo možné přidat k 12 znakům stárnutí uvedeným výše:

13. Změněné mechanické vlastnosti

Mechanobiologie zkoumá koncept, podle něhož stárnutí mění mechanické vlastnosti tkání. Zabývá se tím, jak mechanické síly a změny mechanických vlastností buněk a tkání přispívají k nemocem a stárnutí. Mechanoterapie, včetně svépomocných terapií, jako jsou protahovací a pohybová cvičení, mohou pomoci obnovit tkáň.(32-33)

14. Buněčné zvětšení

Zvětšování buněk (buněčná hypertrofie) souvisí se stárnutím a buněčnou senescencí. Výzkum ukázal, že jak buňky stárnou, mají tendenci se zvětšovat, a tato změna může ovlivnit buněčnou funkci. Buňky však fungují nejlépe, když nejsou zvětšené. Zdá se, že osvojení si výživné stravy je velmi prospěšné pro účinný boj proti buněčnému zvětšování.(34-35)

15. Dysregulace sestřihu RNA

Dysregulace sestřihu RNA, jednoho ze znaků stárnutí, souvisí s přepisem genetického kódu do messenger RNA (mRNA) před jejím překladem do proteinů. S přibývajícím věkem se může přesnost tohoto procesu sestřihu zhoršovat, což vede k různým onemocněním souvisejícím s věkem, jako jsou rakovina a diabetes 2. typu. Výzkum ukázal, že středomořská strava pozitivně ovlivňuje problémy související s dysregulací sestřihu.(36-38)

Závěr

Těchto 15 znaků poskytuje rámec pro pochopení složitých biologických procesů stárnutí. Jsou zásadní pro vývoj přírodních i medicínských intervencí, které mohou zpomalit a potenciálně zvrátit některé aspekty procesu stárnutí.

🔬 Pochopení provázané povahy těchto znaků je zásadní pro vývoj komplexních přístupů ke zdravému stárnutí. Jak výzkum pokračuje, naše porozumění mechanismům stárnutí se prohloubí, což může vést k průlomům v prodloužení nejen délky života, ale i healthspan—období života prožitého v dobrém zdraví.

Vědecké reference:

1. López-Otín, C. & Blasco, M. & Partridge, L. & Serrano, M. & Kroemer, G. (2013). The hallmarks of aging. Cell 153 (6): 1194–1217.
2. Moskalev, A. et al. (2013). The role of DNA damage and repair in aging through the prism of Koch-like criteria. Ageing Research Reviews 12 (2): 661–684.
   
3. Hoeijmakers, J.(2009). DNA damage, aging, and cancer. New England Journal of Medicine 361 (15): 1475–1485.
4. Blackburn, E. &, Greider, C. & Szostak, J. (2006). Telomeres and telomerase: The path from maize, Tetrahymena and yeast to human cancer and aging. Nature Medicine 12 (10): 1133–1138.
5. Blasco, M. (2007). Telomere length, stem cells and aging. Nature Chemical Biology 3 (10): 640–649.
6. Palm, W, & de Lange, T. (2008). How shelterin protects mammalian telomeres. Annual Review of Genetics 42: 301–334.
7. Fumagalli, M. et al. (2012). Telomeric DNA damage is irreparable and causes persistent DNA-damage-response activation. Nature Cell Biology 14 (4): 355–365.
8. Talens, R. et al. (2012). Epigenetic variation during the adult lifespan: Cross‐sectional and longitudinal data on monozygotic twin pairs. Aging Cell 11 (4): 694–703.
9. Fraga, M. & Esteller, M. (2007). Epigenetics and aging: The targets and the marks. Trends in Genetics 23 (8): 413–418.
10. Guarente, L. (2011). Sirtuins, aging, and metabolism. Cold Spring Harbor Symposia On Quantitative Biology 76: 81–90. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
11. Hartl, F. & Bracher, A. & Hayer-Hartl, M. (2011). Molecular chaperones in protein folding and proteostasis. Nature 475 (7356): 324–332.
12. Koga, H. & Kaushik, S. & Cuervo, A. (2011). Protein homeostasis and aging: The importance of exquisite quality control. Ageing Research Reviews 10 (2): 205–215.
13. Powers, E. & Morimoto, R. & Dillin, A. & Kelly, J. & Balch, W. (2009). Biological and chemical approaches to diseases of proteostasis deficiency. Annual Review of Biochemistry 78: 959–991.
14. Barzilai, N. & Huffman, D. & Muzumdar, R. & Bartke, A. (2012). The critical role of metabolic pathways in aging. Diabetes 61 (6): 1315–1322.
15. Houtkooper, R. & Williams, R. & Auwerx, J. (2010). Metabolic networks of longevity. Cell 142 (1): 9–14.
16. Papadopoli, D. et al. (2019). mTOR as a central regulator of lifespan and aging. F1000Research 8: F1000 Faculty Rev-998.
17. Green, D. & Galluzzi, L. & Kroemer, G. (2011). Mitochondria and the autophagy–inflammation–cell death axis in organismal aging. Science 333 (6046): 1109–1112.
    
18. Sahin, E. & DePinho, R. (2012). Axis of ageing: telomeres, p53 and mitochondria. Nature reviews Molecular Cell Biology 13 (6): 397–404.
19. Wang, K. & Klionsky, D. (2011). Mitochondria removal by autophagy. Autophagy 7 (3): 297–300.
20. Kuilman, T. & Michaloglou, C. & Mooi, W. & Peeper, D. (2010). The essence of senescence. Genes & Development 24 (22): 2463–2479.
21. Schultz, M. & Sinclair, D. (2016). When stem cells grow old: Phenotypes and mechanisms of stem cell aging. Development 143 (1): 3–14.
22. Rossi, D. et al. (2007). Deficiencies in DNA damage repair limit the function of haematopoietic stem cells with age. Nature 447 (7145): 725–729.
23. Janzen, V. et al. (2006). Stem-cell ageing modified by the cyclin-dependent kinase inhibitor p16INK4a. Nature 443 (7110): 421–426.
24. Rossi, D. et al (2007). Deficiencies in DNA damage repair limit the function of haematopoietic stem cells with age. Nature 447 (7145): 725–729.
25. Salminen, A. & Kaarniranta, K. & Kauppinen, A. (2012). Inflammaging: Disturbed interplay between autophagy and inflammasomes. Aging 4 (3): 166.
26. Nelson, G. et al. (2012). A senescent cell bystander effect: Senescence-induced senescence. Aging Cell 11 (2): 345–349.
27. Fedintsev, A. & Moskalev, A. (2020). Stochastic non-enzymatic modification of long-lived macromolecules—a missing hallmark of aging. Ageing Research Reviews 62: 101097.
28. López-Otín, C. & Blasco, M. & Partridge, L. & Serrano, M. & Kroemer, G. (2023). Hallmarks of aging: An expanding universe. Cell 186 (2): P243–278.
29. Wilmanski, T. et al. (2021). Gut microbiome pattern reflects healthy ageing and predicts survival in humans. Nature Metabolism 3 (2): 274–286.
30. Hirata, T. et al. (2020). Associations of cardiovascular biomarkers and plasma albumin with exceptional survival to the highest ages. Nature communications 11 (1): 3820.
31. Levine, B. & Kroemer, G. (2019). Biological functions of autophagy genes: A disease perspective. Cell 176 (1-2): 11–42.
32. Phillip, J. & Aifuwa, I. & Walston, J. & Wirtz, D. (2015). The mechanobiology of aging. Annual Review of Biomedical Engineering 17: 113–141.
33. Tschumperlin, D. & Lagares, D. (2020). Mechano-therapeutics: Targeting mechanical signaling in fibrosis and tumor stroma. Pharmacology & Therapeutics 212: 107575.
34. Lengefeld, J. et al. (2021). Cell size is a determinant of stem cell potential during aging. Science Advances 7 (46): eabk0271.
35. Davies, D. & van den Handel, K. & Bharadwaj, S. & Lengefeld, J. (2022). Cellular enlargement—A new hallmark of aging? Frontiers in Cell and Developmental Biology 10: 1036602.
36. Angarola, B. & Anczuków, O. (2021). Splicing alterations in healthy aging and disease. Wiley Interdisciplinary Reviews: RNA 12 (4): e1643.
37. Stegeman, R., & Weake, V. (2017). Transcriptional signatures of aging. Journal of Molecular Biology 429 (16): 2427–2437.
38. del Río-Moreno, M. et al. (2020). Dietary intervention modulates the expression of splicing machinery in cardiovascular patients at high risk of type 2 diabetes development: Ffrom the CORDIOPREV study. Nutrients 12 (11): 3528.